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無細(xì)胞表達(dá)膜蛋白“叒”獲突破,SPR實測超高親和力!

更新時間:2025-11-14      點擊次數(shù):174

在藥物開發(fā)領(lǐng)域,靶點膜蛋白制備一直是科研工作者面臨的重大挑戰(zhàn)。傳統(tǒng)表達(dá)系統(tǒng)難以實現(xiàn)功能性膜蛋白的高效制備,嚴(yán)重制約了藥物開發(fā)進(jìn)程。

近日,珀羅汀生物采用無細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng),成功制備出高活性人源SSTR2膜蛋白,經(jīng)表面等離子共振技術(shù)完成精準(zhǔn)親和力檢測,實測其對相應(yīng)抗體展現(xiàn)出超高親和力,KD值達(dá)0.649 nM!


SPR技術(shù):分子互作檢測的"金標(biāo)準(zhǔn)"


表面等離子共振技術(shù)(SPR)作為無標(biāo)記、實時監(jiān)測生物分子相互作用的權(quán)-威方法,能夠精準(zhǔn)解析結(jié)合參數(shù)(ka、kd及KD值),提供分子互作的全面信息,被業(yè)界認(rèn)為親和力檢測的可靠技術(shù)平臺。


本次實驗以Tidutamab類似物(Human IgG1)作配體,將其捕獲在Protein A芯片,濃度為1 μg/mL。將分析物SSTR2膜蛋白稀釋為5個濃度梯度(12.5 nM ~200 nM),分別進(jìn)行檢測。SSTR2膜蛋白由珀羅汀生物無細(xì)胞蛋白表達(dá)平臺制備,產(chǎn)品名稱:Human SSTR2 Full-Length Protein,產(chǎn)品編號:PLDP0047-1;運行試劑:1*PBS,0.05% DDM,0.01% CHS,pH 7.4。


無細(xì)胞表達(dá)膜蛋白“叒


珀羅汀膜蛋白產(chǎn)品目錄


無細(xì)胞表達(dá)膜蛋白“叒


SSTR2膜蛋白SDS-PAGE


無細(xì)胞表達(dá)膜蛋白“叒

經(jīng)親和力檢測以及動力學(xué)曲線擬合,SSTR2膜蛋白與Tidutamab類似物的親和力常數(shù)為0.649 nM

無細(xì)胞表達(dá)技術(shù):膜蛋白研究的利器

無細(xì)胞蛋白表達(dá)(CFPS)是一種體外直接合成蛋白質(zhì)的生物反應(yīng)。珀羅汀無細(xì)胞膜蛋白表達(dá)技術(shù)可控性、開放性高,可以在體系中直接添加去垢劑納米盤,為膜蛋白提供類膜環(huán)境,從而實現(xiàn)全長膜蛋白可溶性表達(dá)。珀羅汀無細(xì)胞系統(tǒng)在合成膜蛋白時,無需細(xì)胞內(nèi)表達(dá)時復(fù)雜的靶向、插入、組裝過程,極大提高表達(dá)成功率。


無細(xì)胞+去垢劑表達(dá)體系特點:


規(guī)避毒性問題:無需維持細(xì)胞活力,可大量表達(dá)膜蛋白;


折疊環(huán)境可控:通過優(yōu)化去垢劑類型和濃度,為膜蛋白提供最適折疊環(huán)境。


無細(xì)胞+納米盤表達(dá)優(yōu)勢顯著:


模擬天然環(huán)境:在天然脂質(zhì)雙分子層中完成膜蛋白折疊;

功能更完整:更接近生理狀態(tài)下的構(gòu)象和活性。


本次實驗不僅驗證了無細(xì)胞表達(dá)技術(shù)制備高活性膜蛋白的可靠性,更彰顯了“無細(xì)胞表達(dá)+SPR檢測"組合在膜蛋白研究與藥物開發(fā)中的重要價值:無細(xì)胞表達(dá)極大提高膜蛋白表達(dá)成功率,所得膜蛋白抗原表位完整;SPR提供全親和力參數(shù),結(jié)果準(zhǔn)確可信。

無細(xì)胞表達(dá)+SPR檢測"的新組合將為膜蛋白研究帶來革命性突破!


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